注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
ADA2,3-二氯甲苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析3,5-二叔丁基溴苯 99%

GAPDH2,5-二氯甲苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品O-[(乙氧基羰基)胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟酸鹽  98%

3-Phosphoglyceric Phosphokinase3,4-二氯苯胺 分析標(biāo)準(zhǔn)品1-乙基-(3-二甲基氨基基)碳二亞胺鹽酸鹽 98.5%

Laccase from Rhus vernificera2,2'-二硫雙(4-甲基噻唑) 97%2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氫喹啉 99%

Isocitrate dehydrogenase地美環(huán)素鹽酸鹽 分析標(biāo)準(zhǔn)品2-氟-1,3-二甲基氯化咪唑翁六氟磷酸酯 97%

γ-MDH地美環(huán)素鹽酸鹽 ≥90% (HPLC)乙酸甲脒 99%

Lactoperoxidase from bovine milk順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸乙酯 90%四甲基氟代脲六氟磷酸酯 98%

Pullulanase順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸乙酯 99%9-芴甲基-N-琥珀酰亞胺基碳酸酯 98%

Aldehyde Dehydrogenase, potassium-activated6,7-二羥基 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%芴甲氧羰酰氯 98%

Glycerokinase四丁基氫氧化銨,30 98%芴甲氧羰酰胺 99%

D-LDHp, p’-DDE 分析標(biāo)準(zhǔn)品4-(羥基)苯氧基乙酸 98%

Lipoxidase from soybean2,4-滴異辛酯  分析標(biāo)準(zhǔn)品苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 99%

TIM二乙二二乙 for HPLC, ≥99%1-羥基-苯并-三氮唑(無) 99%

Sucrose Phosphorylase重氮乙酸乙酯 91%,≤10% dichloromethane3-羥基-1,2,3-苯并三-4(3H)-酮 98%

Aldolase from rabbit muscle4－羥基－環(huán)己烷甲酸乙酯 98%2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 99%

GDH-TPI3-甲酰基-2-酸乙酯 97%1-羥基-7-偶氮苯并三氮唑 99%

鹽酸曲唑酮(標(biāo)準(zhǔn)品)solute carrier family 1  溶質(zhì)攜帶物家族-1(抗原)SLC39A11  溶質(zhì)載體家族39成員11抗體

曲洛司坦/ 亞硝酸鹽環(huán)氧雄烷SLC6A4 (solute carrier family 6)  鉀依賴鈉鈣交換蛋白6(抗原)SLC37A4/G6PT2  葡萄糖-6磷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體

曲洛司坦(標(biāo)準(zhǔn)品)Survivin  細(xì)胞凋亡抑制因子的一種（抗原）SLC34A2  磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體

醋酸曲普瑞林BIRC5/Survivin variant  細(xì)胞凋亡抑制因子4（抗原）SLC33A1  乙酰輔酶A轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體

鹽酸萬古霉素SSA/RO (ribonucleoprotein complex,RNP)  核糖核蛋白抗原RO/SSA(抗原)SLC30A3/ZNT3  溶質(zhì)載體鋅轉(zhuǎn)運(yùn)3抗體

鹽酸萬古霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)SSB/La  干燥癥SSB/La蛋白SLC2A4RG/GLUT4 enhancer factor  葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4增強(qiáng)因子抗體

凡德他尼Smad2(Mothers against decapentaplegic homolog 2)  Smad 2(抗原)SLC29A4  腦質(zhì)膜單胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PMAT抗體

伐倫克林SPAG5/map126   相關(guān)抗原5(多肽抗原)SLC27A6/ACSVL2  脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6抗體

伐倫克林(標(biāo)準(zhǔn)品)SP-A (pulmonary surfactant-associated glycoprotein A)  肺表面活性蛋白A(抗原)SLC27A5  脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體

長(zhǎng)春瑞賓/重長(zhǎng)春瑞賓SYVN1(syvial apoptosis inhibitor 1)  滑膜細(xì)胞凋亡抑制物1（抗體）SLC27A2/ACSVL1  長(zhǎng)鏈脂肪酸輔酶A連接酶抗體
鄂木斯克出血熱病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5克

人果糖1,6二磷酸縮酶(FDA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

人過敏毒素/補(bǔ)體片斷4(C4a)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃，避光25毫克

人過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫克

人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT支

人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。