中文名稱：細胞凋亡染色試劑盒(細胞Hoechst染色)

英文名稱：Hoechst Staining Kit
產品規格：100次

產品貨號：LZ-01X6323

發貨周期：1～3天

商品介紹：

公司產品現貨供應，質量有保證、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養操作步驟：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

注意事項：

1、本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數情況孵育 1 小時即可，白細胞需要培養較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

轉化生長因子β2(TGF-β2)英文名稱：TGF-β2 ELISA Kit載脂蛋白E4抗體包裝25g

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轉化生長因子α(TGFα)英文名稱：TGFα ELISA Kit磷化失調癥蛋白1抗體包裝1g

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腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子(TGSF)英文名稱：TGSF ELISA Kit磷化活化復制因子2抗體包裝5g

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腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受體4(TRAIL-R4)英文名稱：TRAIL-R4 ELISA Kit磷化鈉ATP蛋白a1抗體包裝25g

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腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)英文名稱：TRAIL-R1 ELISA Kit磷化乙酰羧化抗體包裝25g

磷化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質/α-晶體蛋白b鏈抗體Pim-2原癌基因(PIM2)R406 (free base) is a potent Syk inhibitor with IC50 of 41 nM in a cell-free ass
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青霉 β-煙酰單核苷酸11去氫血栓烷B2Elisa

阿舒假囊酵母 氟化鍶11脫氫血栓B2Elisa

曲霉屬 香葉木1-3-β-D葡聚糖Elisa

解脂假絲酵母 DL-薄荷14-3-3蛋白etaElisa

白布勒擔孢酵母 N-(2',6'-二甲苯基)-2-甲酰15脂加氧Elisa

白靈側耳 高良姜17β-雌二Elisa

靈芝屬 聚氧烯甘油GP17-羥皮質類固Elisa

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澳型核果褐腐病 7-異氧基異黃酮17-酮皮質類固Elisa

玉米大斑病 1α羥化Elisa